Автор: Э.Р. Каримова

Суть метода мультиплексного анализа

В современной клинико-диагностической практике все чаще возникает необходимость экспрессного и одновременного определения содержания большого числа соединений - как в стационарных клинических лабораториях, так и проведение анализа по месту лечения (point of care диагностика).

В качестве носителя (твердой фазы) используют полистироловые микросферы d=5,6 мкм.На поверхности полистироловых частиц могут быть зафиксированы различного рода биологические молекулярные зонды – антитела, антигены или олигонуклеотиды.

Метод мультиплексного анализа (хМАР) - один из тех, которые позволяют определять в одном образце материала большое количество аналитов для одновременного мониторинга сразу нескольких компонентов того или иного сигнального пути. 
хМАР заключается в использовании наборов микросфер диаметром 5.6 мкм, уникальных по спектральным характеристикам (за счет комбинации внутренних флуорофоров, содержащихся в микросферах), что позволяет проводить мультиплексный анализ (определение нескольких аналитов) в каждом образце. Каждая микросфера снаружи связана с флуоресцентными репортерами - реагентами, взаимодействующими со специфическими аналитами.

Принцип метода

Технология xMAP построена на использовании современных технологий: проточной цитометрии, микросфер из полистирола, маркированных красными и инфракрасными флуорофорами, лазерной детекции, цифровой обработки сигнала и традиционной химии, уникальным образом скомбинированных между собой.

Для выявления того или иного аналита проводят инкубацию микросфер с образцом (сыворотка, плазма, моча, ПЦР-продукт и т.д.) . Для проявления реакции, используют конъюгат стрептавидина с фикоэритрином – флуоресцентная метка – источник флуоресцентного сигнала. Интенсивность свечения фикоэритрина будет пропорциональна концентрации (наличию) искомого аналита.

Преимущества

Во время измерения, в проточной ячейке анализатора Luminexв потоке обжимающей жидкости каждая микросфера подвергается облучению двумя лазерами (зеленым и красным) с разной длиной волны и флуоресцентный сигнал, испускаемый флурофорами, регистрируется фотодетекторами прибора. Таким образом, анализируется одновременно тип микросферы и наличие (концентрация) искомого аналита на соответствующем типе частиц.

Преимущества:

1. От­кры­тая ана­лити­чес­кая плат­форма (ре­аген­ты про­из­во­дятся  бо­лее 50 раз­личными ком­па­ниями, спе­ци­али­зиру­ющих­ся на соз­да­нии,  как кли­ничес­ких ди­аг­ности­чес­ких тест-сис­тем, так и ог­ромно­го раз­но­об­ра­зия на­боров для на­уч­ных це­лей);

2. Не­боль­шой  объ­ем ис­сле­ду­емо­го об­разца.

Об­ласть при­мене­ния тех­но­логии:

•  оп­ре­деле­ние бел­ко­вых би­омар­ке­ров

•  оп­ре­деле­ние ан­ти­тел раз­личных клас­сов

•  оцен­ка экс­прес­сии бел­ков

•  оп­ре­деле­ние транс­крип­ции ге­нов

•  ге­ноти­пиро­вание и оп­ре­деле­ние му­таций

•  оп­ре­деле­ние лей­коз­ных тран­сло­каций

•  фар­ма­коге­нети­ка

•  хро­мосом­ный ана­лиз

•  кле­точ­ный сиг­на­линг

•  оп­ре­деле­ние он­ко­мар­ке­ров

•  оп­ре­деле­ние мар­ке­ров а­уто­им­мунных за­боле­ваний

•  HLA-ти­пиро­вание

•  оп­ре­деле­ние HLA- и HPA-ан­ти­тел

Тех­но­логия муль­тип­лек­сно­го ана­лиза, ос­но­ван­ная на ис­поль­зо­вании флуорес­ци­ру­ющих мик­ро­час­тиц (xMAP-тех­но­логия), наш­ла ши­рокое примене­ние в раз­личных об­ластях би­оло­гии, ме­дици­ны и фар­ма­коло­гии. Бла­года­ря воз­можнос­ти по­лучить за один тест ин­форма­цию сра­зу о множестве аналитов и вы­сокой чувс­тви­тель­нос­ти дан­но­го ме­тода тех­но­логия флуоресцен­тно­го ана­лиза на  пред­став­ля­ет со­бой удоб­ный инс­тру­мент при вы­пол­не­нии вы­соко­точ­ных и по­токо­вых скрининговых ис­сле­дова­ний.